Cours écrit : Le test ELISA

Fixation de l’antigène : L’antigène connu, spécifique à l’anticorps recherché, est fixé de manière électrostatique au fond de cupules de test (de puits). Les puits sont ensuite lavés pour enlever les antigènes non fixés.

Fixation de l’anticorps à détecter: On verse le sérum à tester dans le puit. S’ils sont présents, les anticorps spécifiques vont se fixer aux antigènes au fond du puit. Un lavage des puits est effectué pour enlever les anticorps non fixés.

Fixation de l’anticorps traceur : On verse dans le puit la solution contenant les anticorps traceurs. Ceux-ci ne peuvent se fixer qu’uniquement sur des anticorps humains. Ainsi si des anticorps humains dirigés contre l’antigène du puits ont été fixés à l’étape précédent, les anticorps traceurs pourront se fixer sur ceux-ci lors de cette étape. Dans le cas contraire ils seront éliminés lors du rinçage.

Révélation : On verse dans le puits la solution contenant le substrat de l’enzyme fixée à l’anticorps traceur. Ce substrat ne pourra être transformé en produit que si le puits contient l’enzyme, c’est à dire si le puits contient des anticorps traceurs fixés aux anticorps humains eux même fixés aux antigènes situés au fond du puit. Le produit formé est de couleur bleue. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité d’enzyme présente et donc à la concentration d’anticorps recherchés. Un puits bleu indique une séropositivité et un puit incolore traduit une séronégativité.